一、常規(guī)溶液
(一)1/15mol/L PBS(磷酸緩沖液Phosphate Buffer Solution,PBS)
甲液:1/15mol/L Na2HPO4溶液
Na2HPO4 9.465g
蒸餾水 加至1000ml
乙液:l/15mol/L KH2PO4溶液
KH2P04 9.07g
蒸餾水 加至1000m1
分裝在棕色瓶內(nèi),于4℃冰箱中保存,用時甲、乙兩液各按不同比例混合,即可得所需pH的緩沖液,見下表:
pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI
5.29
5.59
5.91
6.24
6.47
6.64 2.5
5.0
10.0
20.0
30.0
40.0 97.5
95.0
90.0
80.0
70.0
60.0 6.81
6.98
7.17
7.38
7.73
8.04 50.0
60.0
70.0
80.0
90.0
95.0 50.0
40.0
30.0
20.0
10.0
5.0
(二)0.3%臺盼蘭染液
稱取臺盼蘭(Trypan blue)粉0.3克,溶于100ml生理鹽水中,加熱使之*溶解,用濾紙過濾除渣,裝入瓶內(nèi)室溫保存。
(三)0.5%酚紅指示劑
酚紅 0.5g
0.1N(0.4%)NaOH 15ml
雙蒸水 85ml
將0.5克酚紅置研缽中,緩漫滴加0.1NNaOH溶液邊加邊磨,并不斷吸出已溶解的酚紅液,直至全部溶解,然后加入85ml雙蒸水,顏色為深紅,經(jīng)粗濾紙過濾后使用,室溫保存。
(四)5.6%NaHCO3溶液
稱NaHCO35.6克,溶于100ml蒸餾水中,室溫保存即可(如需要也可10磅15分鐘高壓滅菌,4℃冰箱保存)
(五)10μg/ml秋水仙素
秋水仙素 lOmg
生理鹽水 100ml
裝入茶色瓶中,為貯備液,4℃冰箱中保存。甩時取貯備液1ml加生理鹽水9ml即可。
(六)0.4%KCl-0.4%檸檬酸鈉低滲液
將0.4%KCl和0.4%檸檬酸鈉兩液等量混合即可,室溫保存。
(七)2%檸檬酸鈉
稱取檸檬酸鈉2克,加100ml雙蒸水即可,室溫保存。
(八)0.2%次甲基蘭染液
稱次甲基蘭(Methylene blue)0.2克,加蒸餾水100ml,室溫保存。
(九)0.5%醋酸洋紅(Aceio Carmine)染液
洋紅 lg
醋酸 90ml
蒸餾水 110ml
將90ml醋酸加入110ml蒸餾水煮沸,然后將火焰移去,立即加入1克洋紅,使之迅速冷卻過濾,加飽和氫氧化鐵(媒染劑)水溶液數(shù)滴,直到呈葡萄酒色。室溫保存。加鐵使洋紅沉淀于組織而著色。此染液室溫存放時間越長效果越好,室溫保存。
(十)1%甲苯胺蘭(Toluidine blue)
稱取甲苯胺蘭1克,加蒸餾水lOOml。
(十一)1/3000中性紅染液
取中性紅(Neutral red)0.1克,加蒸餾水300ml。室溫保存。
(十二)Giemsa染液
1.貯備液
Giemsa粉 1g
純甘油 66ml
甲醇 66ml
先將Giemsa粉置于研缽中加少量甘油,充分研磨,呈無顆粒的糊狀。再將全部甘油加入,放入56℃溫箱中2小時,然后加入甲醇,保存于茶色瓶中。一般兩周后使用為好。
2.工作液
臨用時將貯備液與pH6.8的磷酸緩沖液按照1:20混合。
(十三)埃利希(Ehrlich)蘇木精染液
蘇木精 1.0g
乙醇 50ml
醋酸 5ml
甘油 50ml
硫酸鋁鉀 5g
蒸餾水 50ml
將蘇木精溶于少量的乙醇中,再加醋酸并攪拌,以加速其溶解。當(dāng)蘇木精溶解后將甘油加入并搖動容器,同時加入其余的乙醇;硫酸鋁鉀需研磨并加熱,然后溶解于蒸餾水中,將其一滴滴地加入上邊的溶液,并不斷搖動,此液配好后,將瓶口用紗布蓋好,置通風(fēng)處,經(jīng)常搖動以加速其成熟,成熟約需4周左右,成熟的染液為深紅色。
二、細胞化學(xué)和細胞組分分離溶液
(一)M一緩沖液
瞇唑(Imidazole) 3.404g
KCI 3.7g
MgCl2·6H2O 101.65mg
ECTA 380.35mg
EDTA 29.224mg
巰基乙醇 0.07ml
甘油 297ml
蒸餾水 加至1000ml
用lNHCl調(diào)pH至7.2室溫保存。
(二)2%Triton X一100溶液
量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液,加M緩沖液98ml即可。
(三)0.2%考馬斯亮蘭R-250染液
甲醇 46.5ml
醋酸 7.0ml
考馬斯亮蘭 0.2g
蒸餾水 加至100ml
(四)A.0.1%堿性固綠染液(pH8.0~8.5)
1.0.1%固綠水溶液
固綠(Fast green) 0.1g
蒸餾水 100ml
2.0.05%Na2C03溶液
Na2C03 50mg
蒸餾水 100ml
用時按1:1體積混合即可。
B.0.1%酸性固綠染液(pH2.2)
1.0.1%固綠水溶液。
2.mol/L×75鹽酸液
鹽酸(比重1.19)0.109ml加蒸餾水至100ml
用時按l:1混合。
(五)甲基綠一哌咯寧染液
1.1mol/L醋酸緩沖液(pH4.8):
(1)醋酸 17ml
蒸餾水 加至200ml
(2)醋酸水 13.5g
蒸餾水 加至lOOml
用時分別取兩液40ml、60ml混勻即可。
2.甲基綠一哌咯寧(methyl green—Pyrcnln)
5%哌咯寧水溶液 6ml
2%甲基綠水溶液 6ml
蒸餾水 16ml
lmol/L醋酸緩沖液 16ml
lmol/L醋酸緩沖液臨用時才可加入染液中。
(六)Schiff試劑
將堿性品紅0.5克加入lOOml沸水,持續(xù)煮沸5分鐘,并隨時攪拌,待冷卻到50℃時過濾到棕色瓶中,加1N HC11O毫升,冷卻至25℃時加入1克NaHSO3,此時需很好的振蕩,避光過夜。次日取出(呈淡黃色)加0.25克活性炭劇烈振蕩1分鐘。過濾后即得Schiff試劑。避光低溫保存。
(七)聯(lián)苯胺混合液
聯(lián)苯胺(4.4 Diamino benzidine) 0.2g
95%乙醇 lOOml
3%過氧化氫 2滴
此液臨用時配制。
(八)l%番紅水溶液
番紅(Safranin) 1.0g
蒸餾水 100ml
(九)1%SDS(十二烷基硫酸鈉Sodium dodecyl sulfate,SDS)
SDS 10g
45%乙醇 100ml
(十)1mol/LTris(三羥甲基氨基甲烷/鹽酸緩沖液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8
Tris 12.114g
蒸餾水 lOOml
先將Tris溶于少量蒸餾水,用HCI調(diào)pH至7.8,然后加水至100ml
(十一)Ringer Solution
氯化鈉(冷血動物用0.65克) 0.9克
氯化鉀 0.042克
氯化鈣 0.025克
蒸餾水 100ml
(十二)淀粉肉湯培養(yǎng)基
蛋白 2g
淀粉 6g
牛肉湯 100ml
用10%NaHCO3調(diào)pH至7.0~7.2
(十三)0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液
蔗糖 85.5g
氯化鈣 0.33g
蒸餾水 1000ml
(十四)1%詹納斯綠B染液
取詹納斯綠(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml
(十五)1%剛果紅染液
剛果紅 1g
蒸餾水 100ml
(十六)Gomori*作用液
0.05mol/L醋酸緩沖液(pH5) lOOml
0.6醋酸加蒸餾水200ml、取其 42ml
醋酸鈉1.36g加蒸餾水200ml,取其158ml共200ml
B-甘油磷酸鈉 2g
醋酸鉛 2g
5%氯化鎂 5ml
以上作用液在臨用時配制,zui終在pH5~5.2,過濾使用。
(王世藩 匯編)
三、細胞培養(yǎng)和細胞融合溶液
(一)0.01mol/LPBS(磷酸鹽緩沖液Phosphate Buffer Saline,PBS)pH7.2。
0.2mol/L磷酸氫二鈉液(甲液):
NaH2PO4·12H2O 35.814g
雙蒸水 加至500ml
0.2mol/L磷酸二氫鈉液(乙液):
NaH2PO4·12H2O 15.601g
雙蒸水 加至500ml
取甲液36ml,乙液14ml和NaCl8.2克,加雙蒸水至1000ml?;靹虼?溶解分裝,經(jīng)高壓滅菌后保存于4℃冰箱備用。
(二)50%PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)
稱取0.5克PEG,用前放入試管中在酒精燈火焰上熔化,加入等量37℃予熱的MEM培養(yǎng)液,混勻,保溫在37℃水浴中待用。
(三)MEM培養(yǎng)液(含10%小牛血清)
MEM培養(yǎng)液(日本制藥株式會社) 9.4g
雙蒸水 1000ml
NaHCO3 1.5g
谷氨酰胺(L-glutamin) 0.292g
56℃滅活30分鐘的小牛血清110ml
MEM粉末加水溶解后,用NaHCO3調(diào)pH到7.1(因在抽濾過程中pH升高0.2~0.3),然后加滅活的小牛血清和谷氨酰胺,待*溶解后,立即用G6抽濾除菌,分裝,置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br /> (四)0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA混合消化液
胰蛋白酶(Trypsin)粉 0.25g
EDTA粉 20.0mg
0.01mol/L PBS 100ml
先用少量PBS溶解胰蛋白酶,然后將EDTA粉末和剩下的液體加入混合,置37℃水浴中1小時左右(待*溶解,液體呈透明為止),用G5抽濾,分裝置4℃冰箱中保存。
(五)Hanks液
1.原液甲
NaCl 160g
KCl 8g
MgSO4·7H2O 2g
MgCI2·6H2O 2g
溶于800ml餾水中。
CaCl2(無水) 2.8g
溶于100ml蒸餾水中。
將兩種液體混合后,加水至1000ml用濾紙濾過,再加2ml氯仿防腐,置4℃冰箱備用。
原液乙
Na2HPO4·12H2O 3.04g
KH2PO4 1.2g
葡萄糖 20.0g
溶于800ml蒸餾水中,用濾紙過濾,然后加0.5%酚紅80ml,再加水至1000ml,zui后加入2ml氯仿防腐,置4℃冰箱備用。
2.使用液
甲乙兩液各1份,雙蒸水18份,混勻分裝包扎好瓶口,經(jīng)10磅15分鐘高壓滅菌后置4℃冰箱中保存。使用時用5.6%NaHCO3調(diào)pH值到所需要求。
(六)1640培養(yǎng)液(含lO%小牛血清)
RPMI-1640粉 10.39g
雙蒸水 加至1000ml
通入適量的C02氣體,邊通入CO2邊慢慢攪拌,使其(呈透明)*溶解。用NaHCO31.5克調(diào)pH值到7.2。
雙抗1萬u/ml 10ml
滅活小牛血清 110ml
混勻上述液體,立即用G6抽濾除菌分裝,置4℃冰箱備用。
(七)青、鏈霉素溶液
青霉素鈉鹽(40萬u/瓶) 5瓶
鏈霉素(100萬u/瓶) 2瓶
將兩者溶于200ml0.9%的無菌生理鹽水,分裝小瓶,-30℃保存。雙抗在培養(yǎng)基中的終濃度為各lOOu為宜。
(八)二甲基亞砜誘導(dǎo)HL-60細胞分化使用的終濃度為1。4%。
(九)BrdU溶液(200ug/m1)
用無菌青霉素瓶,在室溫下稱取1.0mg,在無菌條件下加入滅菌生理鹽水9.0ml,溶解,混勻,用黑紙包嚴,避光置冰箱冰格中保存。用時現(xiàn)配。
(十)2×SSC溶液
用分析天平稱取氯化鈉17.53克,檸檬酸鈉8.82克溶于蒸餾水中,加蒸餾水至1000毫升。
(十一)3%瓊脂:
取瓊脂粉3克,加入雙蒸水到100毫升,攪勻,高壓消毒后(15磅20分鐘),冷藏備用,使用前重新加熱煮沸(貯存時間不宜過長)。
四、制備電鏡標本的溶液
(一)2.5%戊二醛溶液
25%戊二醛 lOml
0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液
裝入茶色瓶中,保存于4℃冰箱備用。
(二)0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液
二甲砷酸鈉 10.70g
蒸餾水 500ml
將二甲砷酸鈉置于500ml容量瓶中,先加水約400ml,震蕩使其溶解,用HCl調(diào)pH到7.4,加入剩余蒸餾水,4℃冰箱保存。
(三)包埋劑
環(huán)氧樹脂Epon812 56.30g
DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic
anhydride,DDSA) 14.60g
MNA(甲基內(nèi)次甲基鄰苯二甲酸酐Methyl Nadic)
anhydride,MNA 29.00g
混合上述三種包埋劑成分,攪拌30分鐘使其充分混勻。再加加速劑2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2,4,6-tridimethyl aminomethylphenol,DMP-30)1.5ml,繼續(xù)攪拌30分鐘,置于干燥罐中(室溫)備用。
(四)2%單寧酸
單寧酸 2g
雙蒸水 100ml
溶解后過濾裝茶色瓶中,4℃冰箱保存。
(五)高錳酸鉀固定劑
檸檬酸三鈉 60mmol/L
氯化鉀 25mmol/L
氯化鎂 35mmol/L
高錳酸鉀 125mmol/L
pH為7.4-7.8,裝茶色瓶中,4℃冰箱中保存,有效期2個月左右。
(六)1%OsO4溶液
OsO4 0.5g
0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液。 50ml
OsO4一般為0.5或1克安瓶中封閉包裝,配制時剝?nèi)ド虡?,用自來水洗凈,放洗滌液中?~12小時后用水沖洗,在安瓶上劃痕,用蒸餾水洗凈,投入茶色瓶中,加緩沖液,用玻璃棒在瓶中搗碎,輕輕搖動放冰箱中,48小時后*溶解。此藥蒸氣對人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用,用時特別小心,在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。
五、顯影、定影溶液
(一)D-72顯影液
溫水(52℃) 750ml
米吐爾 3g
無水亞硫酸鈉 45g
對苯二酚 12g
無水碳酸鈉 67.5g
溴化鉀 19g
水 加至1000ml
D-72顯影液為通用顯影液,既能顯影膠片又能用于相紙顯影。
使用原液,20℃顯影時間1~2分鐘可得高反差。
加水1:2稀釋后使用可得較低反差。1:1稀釋使用。20℃時顯影時間3~4分鐘可得正常反差。
(二)SB-1停顯液配方
水 1000ml
28%醋酸 48ml
停顯時間lO秒左右。
(三)F-5酸性堅膜定影液
水 750ml
硫代硫酸鈉 240g
無水亞硫酸鈉 15g
28%醋酸 48ml
硼酸 7.5g
鉀礬 15g
水 1000ml
定影時,藥液溫度應(yīng)保持在18~20℃定影時間10~15分鐘。
配藥原則
配制時先取容量3/4的清水,水溫50℃左右,按配方的順序,把稱好的藥逐一加入,只有前一藥品溶解后,方可放入第二種藥品,并繼續(xù)溶解下去,zui后將清水加至全量。
配完后要經(jīng)12小時,待各種藥品充分作用后才能使用。
上述各種溶液配制好后,勻應(yīng)貼瓶簽,注明名稱,濃度及配制日期,并按規(guī)定方法保存,用前檢查有無變質(zhì)或污染現(xiàn)象后,方可使用
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