YIJI 活體組織氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級熒光測定試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

YIJI 活體組織氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級熒光測定試劑是一種旨在通過透膜熒光染色劑二氯熒光乙

酰乙酸鹽，在組織氧化損傷條件下，產(chǎn)生熒光，來定量檢測組織內(nèi)活性氧族的生成和增加的而經(jīng)典的

技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。適宜于活體動物組織的分析?？梢员挥糜?/span>

細胞凋亡、信號傳遞、衰老、代謝和營養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡易，活體檢測，

性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基

（hydroxyl radical；OH-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷

氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）

次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等

細胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細胞衰老或凋亡。2',7'-二氯熒光

乙酰乙酸鹽（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一種*自由通過細胞膜的染色劑。一旦被過

氧化氫、過氧化基、過氧亞硝基陰離子等氧化，便產(chǎn)生綠色熒光。據(jù)此測定組織細胞內(nèi)活性氧族的濃度。

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI 清理液（Reagent A）

YIJI 染色液（Reagent B）

YIJI 稀釋液（Reagent C）

產(chǎn)品說明書

毫升

毫升

毫升

1份

保存方式

保存 YIJI 染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保

證 12 月

用戶自備

50 毫升錐形離心管：用于組織收集的容器

15 毫升錐形離心管：用于工作液配制和組織處理的容器

1.5 毫升離心管：用于工作液配制的容器

6 孔細胞培養(yǎng)板：用于組織染色的容器

培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于染色孵育

熒光顯微鏡：用于觀察熒光組織

熒光分光光度儀：用于組織熒光定量檢測

實驗步驟

方法一：新鮮組織薄片定性檢測

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI

稀釋液（Reagent C）放進 37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出 xx 微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新

的 15 毫升錐形離心管，加入 xx 毫升 YIJI 稀釋液（Reagent C)，混勻后，將 YIJI 染色工作液

置入暗室里。然后進行下列操作。

1． 手術(shù)取出動物組織

2． 放進預(yù)冷的 50 毫升錐形離心管

3． 加入 xx 毫升 YIJI 清理液（Reagent A）浸泡 15 秒

4． 用鑷子取出組織，用無菌綿紙吸干

5． 即刻用刀片切離組織為 1cm X 1cm 大小的片狀組織

6． 用鑷子將組織薄片放進 6 孔培養(yǎng)板的一個孔

7． 加入 xx 毫升含有 YIJI 染色液（Reagent B）和 YIJI 稀釋液（Reagent C）的 YIJI 染

色工作液

8． 放進 37℃培養(yǎng)箱孵育 20 分鐘，避免光照（注意：如果組織薄片較厚，可以增加孵育時間至 60 分鐘）

9． 小心抽去 YIJI 染色工作液

10．加入 xx 毫升 YIJI 清理液（Reagent A）

11．用鑷子將組織薄片放在載玻片上

12．壓片

13．即刻在熒光顯微鏡下觀察（定性檢測）：激發(fā)波長 490nm，散發(fā)波長 520nm――綠色熒光增強，表明活

性氧族（ROS）含量高

方法二：組織勻漿定量檢測

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI

稀釋液（Reagent C）放進 37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出 xx 微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新

的 1.5 毫升離心管，加入 xx 微升 YIJI 稀釋液（Reagent C)，混勻后，將 YIJI 染色工作液置入

暗室里。然后進行下列操作。

1． 手術(shù)取出動物組織，并秤重以確定組織重量

2． 移取 1 克組織，放進預(yù)冷的 50 毫升錐形離心管

3． 加入 xx 毫升的 YIJI 清理液（Reagent A）

4． 用鑷子取出組織，用無菌綿紙吸干

5． 即刻用刀片切碎組織

6． 放進一個預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管

7． 加入 xx 毫升預(yù)冷的 YIJI 稀釋液（Reagent C）

8． 渦旋震蕩 5 秒，充分混勻

9． 即刻放入預(yù)冷的 DOUNCE 勻漿器

10．在冰槽里用研磨棒勻化組織（注意：切莫過度勻化）

11．將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管

12．置入冰槽里備用

13．移取 5 微升組織勻漿物進行蛋白定量檢測：建議使用 YIJI Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒

（GMS30030.1）

14．移取 xx 微升組織勻漿物（樣品）或 xx 微升 YIJI 稀釋液（Reagent C）（背景對照）到 1 毫升石

英比色杯里

15．加入 xx 微升升含有 YIJI 染色液（Reagent B）和 YIJI 稀釋液（Reagent C）的 YIJI

染色工作液

16．上下傾倒混勻

17．放進 37℃恒溫水槽孵育 20 分鐘，避免光照

18．即刻放進熒光分光光度儀檢測：激發(fā)波長 490nm，散發(fā)波長 520nm——（樣品 RFU-對照 RFU）＝實

際 RFU：增加，表明活性氧族（ROS）含量高

方法二：組織勻漿微量檢測

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI

稀釋液（Reagent C）放進 37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出 xx 微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新

的 1.5 毫升離心管，加入 xx 微升 YIJI 稀釋液（Reagent C)，混勻后，將 YIJI 染色工作液置入

暗室里。然后進行下列操作。

1． 手術(shù)取出動物組織，并秤重以確定組織重量

2． 移取 200 毫克組織，放進預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管

3． 加入 xx 毫升的 YIJI 清理液（Reagent A）

4． 用鑷子取出組織，用無菌綿紙吸干

5． 即刻用刀片切碎組織

6． 放進一個預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管

7． 加入 xx 毫升預(yù)冷的 YIJI 稀釋液（Reagent C）

8． 渦旋震蕩 5 秒，充分混勻

9． 即刻放入預(yù)冷的 DOUNCE 勻漿器

10．在冰槽里用研磨棒勻化組織（注意：切莫過度勻化）

11．將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管

12．置入冰槽里備用

13．移取 xx 微升組織勻漿物進行蛋白定量檢測：建議使用 YIJI Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒

（GMS30030.1）

14．移取 xxx 微升組織勻漿物（樣品）或 xx 微升 YIJI 稀釋液（Reagent C）（背景對照）到 1 毫升石

英比色杯里

15．加入 xx 微升升含有 YIJI 染色液（Reagent B）和 YIJI 稀釋液（Reagent C）的 YIJI

染色工作液

16．上下傾倒混勻

17．放進 37℃恒溫水槽孵育 20 分鐘，避免光照

18．即刻放進熒光酶標儀檢測：激發(fā)波長 490nm，散發(fā)波長 520nm——（樣品 RFU-對照 RFU）＝實際 RFU：

增加，表明活性氧族（ROS）含量高

注意事項

1． 本產(chǎn)品為 20 次（1 克組織）、100 次（200 毫克組織）、500 次（200 毫克組織，酶標板）或 40 次（組織薄片）操作

2． 建議使用新鮮組織，手術(shù)切除后 1 小時內(nèi)的樣品

3． 操作時，須戴手套

4． 孵育時，須避免光照

5． 如果組織薄片較厚，可以增加孵育時間至 60 分鐘

6． 組織勻漿時，切莫過度

7． 建議組織染色完成后，即刻進行熒光定量或定性分析

8． 本公司提供陽性對照甲萘醌溶液，觀察組織熒光增強現(xiàn)象

9． 本公司提供系列活性氧檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰