DIG標(biāo)記及檢測試劑盒

DIG（地高辛）DNA標(biāo)記及檢測試劑盒

DIG DNA labeling and Detection Kit

原理：用DIG-dUTP為底物，隨機(jī)摻入法進(jìn)行DNA標(biāo)記，通過酶聯(lián)免疫雜交的方法檢測。該試劑盒可以標(biāo)記25次反應(yīng)，每次標(biāo)記的DNA量為10ug-20ug，并可做50張10×10cm膜的雜交和檢測。 應(yīng)用：非放射性DNA標(biāo)記及檢測試劑盒以檢測0.1pg的同源DNA，能檢測1ug哺乳動(dòng)物DNA中的單拷貝基因。跟放射性標(biāo)記系統(tǒng)比較，此試劑盒能快速得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，而且消除了放射性同位素的不安全問題。從DNA標(biāo)記和雜交能見到檢測結(jié)果，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程24小時(shí)內(nèi)能完成。這試劑盒的靈敏度與特異性使它適用于所有的雜交技術(shù)以替代放射性同位素標(biāo)記和放射自顯影術(shù)。這個(gè)標(biāo)記方法和檢測系統(tǒng)適用于DNA—印跡轉(zhuǎn)移、菌落雜交、噬斑雜交及原位雜交。

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1　HLA概述

　　
　　HLA的定義由三部分組成：（1）對象模型模板（OMT）：是對仿真中的對象、對象屬性和對象間信息交互的格式和內(nèi)容進(jìn)行定義的標(biāo)準(zhǔn)化描述。（2）框架與規(guī)則集： HLA共定義了10條規(guī)則，描述仿真和聯(lián)邦成員的職責(zé)，以確保一個(gè)聯(lián)邦內(nèi)仿真的正確交互。其中前5條規(guī)則規(guī)定一個(gè)聯(lián)邦必須滿足的要求，而后5條規(guī)則則是一 個(gè)聯(lián)邦成員必須滿足的條件。（3）聯(lián)邦成員訪問RTI的接口規(guī)范：描述在操作過程中的仿真交互方式，提供了盟員與RTI之間功能接口，描述了六類服務(wù)，共 101個(gè)操作。
　　
2 對象模型模板（OMT）

　　
　　HLA中的對象模型主要用來描述兩類系統(tǒng)，一類是用來描述聯(lián)邦中的各個(gè)聯(lián)邦成員，即創(chuàng)建各單個(gè)的HLA仿真的對象模型（SOM）。另一類是用來描述一 個(gè)聯(lián)邦中相互之間存在信息交換特性的那些聯(lián)邦成員，即創(chuàng)建HLA的聯(lián)邦對象模型（FOM）。無論是描述SOM還是描述FOM，OMT的主要目的都是為了便于仿真系統(tǒng)的互操作和仿真部件的重用。
　　OMT作為對象模型的模板規(guī)定了記錄這些對象模型內(nèi)容的標(biāo)準(zhǔn)格式和語法。但對于對象模型如何建立，OMT必須記錄哪些內(nèi)容，OMT本身并沒有說明。OMT是HLA實(shí)現(xiàn)互操作和重用的重要機(jī)制之一，由以下幾個(gè)表格組成：
　　·對象模型鑒別表：用來記錄鑒別HLA對象模型的重要信息；
　　·對象類結(jié)構(gòu)表：用來記錄聯(lián)邦／仿真中的對象類及其父類一子類關(guān)系；
　　·交互類結(jié)構(gòu)表：用來記錄聯(lián)邦／仿真中的交互類及其父類一子類關(guān)系；
　　·屬性表：用來說明聯(lián)邦／仿真中對象屬性的特性；
　　·參數(shù)表：用來說明聯(lián)邦／仿真中交互參數(shù)的特性；
　　·枚舉數(shù)據(jù)類型表：用來對出現(xiàn)在屬性表／參數(shù)表中的枚舉數(shù)據(jù)類型進(jìn)行說明；
　　·復(fù)合數(shù)據(jù)類型表：用來對出現(xiàn)在屬性表／參數(shù)表中的復(fù)合數(shù)據(jù)類型進(jìn)行說明；
　　· 路徑空間表：用來說明一個(gè)聯(lián)邦中對象屬性和交互的路徑空間；
　　·FOM／SOM詞典：用來定義各表中使用的所有術(shù)語。
　　當(dāng)描述一個(gè)聯(lián)邦或單個(gè)仿真系統(tǒng)（聯(lián)邦成員）的HLA對象模型時(shí)，它們都必須使用上述幾個(gè)表。即OMT對聯(lián)邦對象模型（FOM）和仿真對象模型 （SOM）都適用。一個(gè)HLA對象模型至少要包含一個(gè)對象類或交互類，但在某些情況下，描述對象模型的一些表可能是空表。
　　
3 HLA的框架和規(guī)則

　　
　?。?） 聯(lián)邦應(yīng)該有一個(gè)聯(lián)邦對象模型FOM，該FOM應(yīng)與HLA的OMT相容。FOM是說明HLA聯(lián)邦數(shù)據(jù)交換的手段，它記錄了聯(lián)邦成員對于在聯(lián)邦運(yùn)行期間需相互交換的數(shù)據(jù)的內(nèi)容、格式及數(shù)據(jù)交換的條件所達(dá)成的協(xié)議。
　?。?） 在一個(gè)聯(lián)邦中，F(xiàn)OM中的所有對象應(yīng)屬于各個(gè)成員而不應(yīng)在RTI中。HLA中，將凡是與仿真有關(guān)的對象實(shí)體的表達(dá)放在聯(lián)邦成員中而不是放在RTI中， 但是RTI可以擁有管理對象模型（MOM）中對象實(shí)例。
　?。?） 在執(zhí)行聯(lián)邦時(shí)，各成員中間所有FOM規(guī)定的數(shù)據(jù)交換必須通過RTI進(jìn)行。HLA中， FOM中描述的對象或交互類的數(shù)據(jù)，都是聯(lián)邦成員之間可能需交換的數(shù)據(jù)，而成員之間要想實(shí)現(xiàn)交換數(shù)據(jù)，只有借助于RTI提供的服務(wù)。
　　（4） 在聯(lián)邦執(zhí)行中，成員應(yīng)按HLA接口規(guī)范與RTI交互，即訪問RTI應(yīng)遵循接口規(guī)范。
　?。?） 在聯(lián)邦執(zhí)行中，在任一給定時(shí)間，一個(gè)對象屬性只能為一個(gè)成員所擁有。HLA中，不同成員可以擁有同一個(gè)對象實(shí)例的不同屬性。為了保證整個(gè)聯(lián)邦中數(shù)據(jù)的一致 性，在任意給定時(shí)間zui多只能讓一個(gè)聯(lián)邦成員擁有（從而有權(quán)改變其值）任意給定的對象實(shí)例的屬性。
　?。?） 聯(lián)邦成員應(yīng)有一個(gè)符合OMT規(guī)范的成員對象模型（SOM）。聯(lián)邦成員通常由實(shí)現(xiàn)仿真功能的仿真系統(tǒng)組成，SOM描述了它們?yōu)閷?shí)現(xiàn)自己的仿真功能，需向外獲取（定購）及本身能向外提供（公布）的信息。
　　（7） 成員應(yīng)能更新和（或）使用其SOM中記錄的對象的屬性，能接收與發(fā)送SOM中記錄的交互。聯(lián)邦成員在聯(lián)邦運(yùn)行中向其它成員公布自己所負(fù)責(zé)建模的對象的屬性 的數(shù)值，及借助于RTI提供的服務(wù)接收自己想要的來自其它成員的屬性數(shù)據(jù)是各個(gè)聯(lián)邦成員的責(zé)任。
　?。?） 成員應(yīng)按SOM中的規(guī)定，在聯(lián)邦執(zhí)行中動(dòng)態(tài)地轉(zhuǎn)移與接收屬性的所有權(quán)。對HLA聯(lián)邦來說，實(shí)際仿真劇情的實(shí)現(xiàn)，常常要在具體的聯(lián)邦成員之間進(jìn)行對象屬性所 有權(quán)動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)換，RTI通過"所有權(quán)管理"提供相應(yīng)的服務(wù)，而具體的實(shí)現(xiàn)是聯(lián)邦成員之間的責(zé)任與合作。
　?。?） 成員應(yīng)按SOM中的規(guī)定，更新對象屬性的條件（如改變閥值）。HLA讓擁有某些對象屬性所有權(quán)的成員有權(quán)產(chǎn)生這些屬性的不斷變化的值（往往通過模型的解算得到），并由它負(fù)責(zé)通過RTI將不斷公布這些屬性值，從而使定購這些屬性的其它成員能得到這些屬性的值。
　?。?0） 成員應(yīng)能管理局部時(shí)間，從而保證它能協(xié)調(diào)地與聯(lián)邦中的其它成員交換數(shù)據(jù)。HLA通過時(shí)間管理服務(wù)給聯(lián)邦成員提供了靈活的仿真時(shí)間推進(jìn)的方法，從而使HLA 可以適用于連續(xù)、離散或混和類型的仿真。但它需要聯(lián)邦成員自己管理自己的邏輯仿真時(shí)間（本地時(shí)間）。

HLA（人類白細(xì)胞抗原）系統(tǒng)是目前所知人體zui復(fù)雜的多態(tài)系統(tǒng)。自1958年發(fā)現(xiàn)（Jean Dausset）*個(gè)HLA抗原，到20世紀(jì)70年代，HLA便成為免疫遺傳學(xué)、免疫生物學(xué)和生物化學(xué)等學(xué)科的一個(gè)重要新興研究領(lǐng)域?，F(xiàn)在，已基本弄清其系統(tǒng)的組成、結(jié)構(gòu)和功能，闡明了其理化性質(zhì)和生物學(xué)作用。這些研究成果不僅具有重要的理論意義，而且具有巨大的生物醫(yī)學(xué)價(jià)值。
　　1 HLA的本質(zhì)及其結(jié)構(gòu)
　　HLA是具有高度多態(tài)性的同種異體抗原，其化學(xué)本質(zhì)為一類糖蛋白，由一條α重鏈（被糖基化的）和一條β輕鏈非共價(jià)結(jié)合而成。其肽鏈的氨基端向外（約占整個(gè)分子的3/4），羧基端穿入細(xì)胞質(zhì)，中間疏水部分在胞膜中。HLA按其分布和功能分為Ⅰ類抗原和Ⅱ類抗原。
　　2 HLA的遺傳控制
　　HLA受控于稱作人類主要組織相容性復(fù)合體（MHC）的基因簇。MHC定位于第6染色體短臂上。
　　HALⅠ類抗原的特異性取決于α重鏈，由HLA-A、B、C位點(diǎn)編碼；其β輕鏈?zhǔn)?beta;2-微球蛋白，編碼基因在第15染色體。HLAⅡ類抗原受控于HLA-D區(qū)（包含5個(gè)亞區(qū)），由其中的A基因和B基因分別為α重鏈和β輕鏈編碼，抗原多態(tài)性取決于β輕鏈。以上各基因（名稱為WHO命名委員會(huì)1975年修訂）均系多態(tài)性位點(diǎn)（復(fù)等位），且共顯性。如果把MHC作為一個(gè)整體來看待，其多態(tài)性則更為突出。保守地估計(jì)，至少存在1300個(gè)不同的單體型，相應(yīng)地約有17×107個(gè)基因型。這就是除同卵雙生子以外幾乎無HLA相同者的遺傳基礎(chǔ)，從而HLA可視作個(gè)體的“身份證”。
　　3 HLA的生物學(xué)意義
　　HLA這一多態(tài)系統(tǒng)在其種系發(fā)展過程中被保存下來，具有特殊的生物學(xué)意義。
　　3．1 靶功能
　　HLAⅠ類抗原分布于所有有核細(xì)胞。其抗原特異性在于肽鏈抗原決定簇的特定氨基酸順序。這些抗原可被外來物質(zhì)例如某種病毒或化學(xué)物質(zhì)加以改變，當(dāng)這些基因產(chǎn)物被改變之后，便成為自身免疫原，成為免疫排除的耙子?？梢?，耙功能的實(shí)質(zhì)在于“識(shí)別自我”，以保證機(jī)體的完整性。因此，分布于所有細(xì)胞及其多態(tài)性這一特點(diǎn)十分重要。
　　3．2 識(shí)別功能
　　HLA的識(shí)別功能實(shí)指在免疫反應(yīng)中*的協(xié)同作用?？贵w在B細(xì)胞生成，但在多數(shù)情況下，需要巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞參與。其過程是：抗原經(jīng)巨噬細(xì)胞處理后，抗原信息傳遞給T輔助細(xì)胞，后者再將信息傳給B細(xì)胞，使B細(xì)胞進(jìn)而分化生成專一抗體。在這個(gè)過程中，T輔助細(xì)胞不僅識(shí)別致敏巨噬細(xì)胞上的抗原，同時(shí)也要識(shí)別巨噬細(xì)胞是否與其本身的Ⅱ類抗原相一致。就是說，只有巨噬細(xì)胞的單體型和T輔助細(xì)胞的單體型相一致時(shí)，T輔助細(xì)胞才被激活，從而使免疫反應(yīng)在嚴(yán)密的遺傳控制下進(jìn)行。
　　4 HLA的醫(yī)學(xué)價(jià)值
　　4．1 HLA與器官移植
　　HLA的研究原初是在器官移植研究推動(dòng)下開展起來的。故此，HLA又稱移植抗原。臨床實(shí)踐表明，同種異體移植（除同卵雙生子外）的排斥應(yīng)是成功率的zui大障礙。在遺傳學(xué)中，MHC是作為一個(gè)單位孟德爾式傳遞的。因此，同胞之間可有HLA相同、半相同和不同3種情況。實(shí)踐證明，HLA相同的同胞供者的腎移植，90％以上效果良好；單體型不同的供者，效果明顯下降；兩單型皆不同者則很少存活。HLA本質(zhì)和功能的揭示，為移植配型提供了重要的理論依據(jù)?？梢哉f，器官移植是當(dāng)代醫(yī)學(xué)一項(xiàng)重要成就。
　　4．2 作為某些疾病的遺傳標(biāo)志
　　1972年Russel*個(gè)報(bào)告銀屑?。ㄅＦぐ_）患者攜帶HLA-B13或HLA-B17。此后陸續(xù)發(fā)現(xiàn)大量其它疾病與特定的HLA相關(guān)，其中，HLA-B27抗原見于大約90％的強(qiáng)直性脊椎炎病人，以至使HLA分型具有了診斷價(jià)值，甚至，能較早地證實(shí)疾病亞型之間的臨床區(qū)別，例如，尋常銀屑病與HLA相關(guān)，而膿皰性銀屑病則不然；青少年性胰島素依賴型糖尿病與HLA-B8、HLA-Bw15和HLA-B18相關(guān)，而晚期發(fā)作型糖尿病并無這種相關(guān)。因此，特定類型的HLA便成為某些疾病的遺傳標(biāo)志。例如，常染色體隱性遺傳的腎上腺皮質(zhì)增生癥是由于21-羥化酶缺乏。應(yīng)用HLA抗原多態(tài)性作群體關(guān)聯(lián)分析和家系連鎖分析，發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)羥化酶位點(diǎn)（21-OHA和21-OHB）與HLA-B、DR緊密連鎖。依此，可用HLA作出產(chǎn)前診斷。在優(yōu)生學(xué)中，可以根據(jù)現(xiàn)有資料，對某些疾病推算出孩子患病的相對風(fēng)險(xiǎn)率。另一方面，關(guān)于HLA與長壽的關(guān)系，亦形成一個(gè)研究熱點(diǎn)。
　　4．３HLA與法醫(yī)
　　HLA因其高度多態(tài)性而成為zui能代表個(gè)體特異性并伴隨個(gè)體終身的穩(wěn)定的遺傳標(biāo)志，在無關(guān)個(gè)體之間HLA型別*相同的幾率級低。法醫(yī)學(xué)通過HLA基因型或表型檢測進(jìn)行個(gè)體識(shí)別以“驗(yàn)明正身”，同時(shí)因其單倍型遺傳特征，也是親子鑒定的重要手段。
　　HLA（體系結(jié)構(gòu)，High Level Architecture）
　　在美國國防建模與仿真辦公室（DMSO）1995年10月制定的建模與仿真主計(jì)劃（MSMP）中，提出了未來建模/仿真的共同技術(shù)框架。它包括三個(gè)方 面：高層體系結(jié)構(gòu)（HLA）、任務(wù)空間概念模型（CMMS）和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)（DS）。它們的共同目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)仿真間的互操作，并促進(jìn)仿真資源的重用，具體地說， 就是通過計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)使得分散分布的各仿真部件能夠在一個(gè)統(tǒng)一的仿真時(shí)間和仿真環(huán)境下協(xié)調(diào)運(yùn)行，且可以重復(fù)使用。HLA的基本思想就是使用面向?qū)ο蟮姆椒ǎ?設(shè)計(jì)、開發(fā)及實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)不同層次和粒度的對象模型，來獲得仿真部件和仿真系統(tǒng)高層次上的互操作性與可重用性。
[編輯本段]高層體系結(jié)構(gòu)
　　1996年8月DMSO正式公布了HLA的定義和規(guī)范。經(jīng)過改進(jìn)完善，HLA的規(guī)則、接口規(guī)范、對象模型模板三項(xiàng)內(nèi)容已在2000年9月22日由美國 IEEE標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)正式定為IEEE1516， IEEE1516.1，IEEE1516.2 HLA標(biāo)準(zhǔn)。OMG，北約M&S組織也采納HLA作為標(biāo)準(zhǔn)。