細胞線粒體分離試劑盒使用說明！

線粒體是細胞呼吸的主要場所，細胞活動所需的能量主要由在線粒體內(nèi)進行的氧化所產(chǎn)生的能量來供應(yīng)。制備線粒體的關(guān)鍵是保持線粒體的完整性和純度，可通過分級分離法獲得，即先低俗出去細胞核以及細胞碎片，再進行高速梯度離心分離線粒體。

產(chǎn)品名稱：細胞線粒體分離試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T

儲存條件：-20℃,12個月

產(chǎn)品組成：試劑(A): Mitochondria Lysis buffer     試劑(B): Wash buffer     試劑(C): Mitochondria Stock buffer   

                 試劑(D): Protein Stock buffer(5×)       試劑(E): PMSF(100×)

細胞線粒體分離試劑盒(Cell Mitochondria Isolation Kit)是快速便捷分離培養(yǎng)細胞中的線粒體的試劑盒，分離線粒體的同時可以獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，可用于分析細胞 色素 C等線粒體蛋白向胞漿的釋放，大部分獲得的線粒體都含有完整的內(nèi)膜和外膜，并具有線粒體的生理功能(如檢測線粒體膜電位)，獲得的蛋白可用于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。

實驗步驟{僅供參考）

1、清洗：用預(yù)冷的PBS清洗細胞1次，4°C1000g離心5min，棄上清。

2、裂解：沉淀用1～2ml預(yù)冷的Mitochondria Lysis buffer重懸細胞，冰浴放置10～15min，可用相差顯微鏡檢測膨脹的程度。

3、勻漿：把細胞懸液轉(zhuǎn)移至Dounce勻漿器中，勻漿10～20次。不同細胞或不同勻漿器所需的勻漿次數(shù)有所不同，需自行優(yōu)化。

4. 取勻漿液，立即加入等量Wash buffer，輕輕顛倒混勻數(shù)次取勻漿液，立即加入等量Wash buffer，輕輕顛倒混勻數(shù)次取勻漿液，立即加入等量Wash buffer，輕輕顛倒混勻數(shù)次取勻漿液，立即加入等量Wash buffer，輕輕顛倒混勻數(shù)次

5、4°C1300g離心5min以去除細胞核、未破碎的細胞和大的膜碎片。

6、上清液轉(zhuǎn)移至一干凈離心管，4°C1000g離心5min，重復(fù)2次。

7、上清液轉(zhuǎn)移至一干凈離心管，4°C12000～15000g離心15min，重復(fù)1次。

8、棄上清，沉淀為線粒體。如果希望獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，應(yīng)在本步驟中收集上清，并且在收集上清時注意勿觸及沉淀，隨后把收集的上清12000g4°C離心10min，上清即為去除線粒體的細胞漿蛋白。

9、保存：棄上清，用適當緩沖液懸浮沉淀。如果用于線粒體酶活性或功能的分析，線粒體沉淀應(yīng)重懸于Mitochondria Stock buffer；如果用于細胞漿蛋白的分析，獲得的細胞漿蛋白應(yīng)保存于1×Protein Stock buffer，即按細胞漿蛋白：Protein Stock buffer (5×)=4：1比例混合；如果用于雙向電泳，應(yīng)使用恰當?shù)谋４嬉骸?/p>