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豬免疫球蛋白A（IgA）定量檢測試劑盒（ELISA）使用說明書

更新時間：2011-08-01   點擊次數(shù)：800次

上海亨代勞商貿有限公司主要從事實驗室設備，免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。并代理銷售多個國外，致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供*的科研試劑和完善的技術服務。咨詢.
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【豬免疫球蛋白A（IgA）Elisa試劑盒試劑盒組成】

1
酶標包被板
12孔×4條
7
顯色劑A液
3mL
2
標準品
0.3mL×6管
8
顯色劑B液
3mL
3
20倍濃縮洗滌液
15mL
9
終止液
3mL
4
樣本稀釋液
3mL
10
說明書
1份
5
特殊稀釋液
3mL
11
封板膜
2張
6
酶標試劑
3mL
12
密封袋
1個

備注：標準品（1號→6號）濃度依次為：80、40、20、10、5、2.5 μg/mL.
 
【豬免疫球蛋白A（IgA）Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2、標準規(guī)格酶標儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5、一次性試管
6、吸水紙
【豬免疫球蛋白A（IgA）Elisa試劑盒操作步驟】
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。
11、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【豬免疫球蛋白A（IgA）Elisa試劑盒樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。
【豬免疫球蛋白A（IgA）Elisa試劑盒注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
2、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量范圍為2.5-80μg/mL，超過此范圍，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果（2.5-80μg/mL范圍內），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
6、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。
7、為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜。
8、試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用。
9、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。